CBA原理详细介绍
Cytometric Bead Array（CBA），即细胞因子微球检测技术。是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。BD公司利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性，将受检的可溶性因子附着于一些具有近似细胞直径的微粒上，即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检测。 CBA的基本原理近似于ELISA的检测，即利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。
详细原理介绍：
每个CBA微球大小一致，具有特定的荧光强度，包被有适用于特定分析（如其它抗体或者可溶性蛋白）的特异性捕获抗体（Capture Antibody），提供了类似ELISA孔板的捕获表面。当微球和待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品（血清、血浆或者细胞培养液）中相应的抗原或蛋白结合，然后加入荧光标记的检测抗体，就会形成“三明治”夹心复合物。最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。CBA的每种微球携带有不同强度的红色荧光，在流式细胞仪的FL3通道通过检测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性；检测抗体带有PE荧光素标记，在流式细胞仪的FL2通道检测，通过检测抗体的PE荧光强度定量目的蛋白。
CBA技术特点：
CBA具有FCM的宽范围荧光检测特点，对样本需求量更少，检测更快速、更准确。下面我们介绍一下CBA主要的技术特点:
1、轻松实现多重检测。最多可同时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量。
2、样本需要量小。仅需要50μL溶液就可进行一次检测。
3、更高的灵敏度。分析灵敏度高达2.8pg/mL。
4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml，所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白定量，排除了ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。
5、检测对象的灵活组合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标，形式比较固定。为满足不同客户的实际需要和研究兴趣，BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改变了CBAkit的固定形式，成为自由组合、灵活搭配的“自助餐”。您可以根据需要组合不同的捕获微球来检测多个指标，最多能同时检测75个指标。除了拥有CBA kit的优势外，Flex Set还配有独立的软件分析系统（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上，直接用96孔和384孔板进行操作。CBA Flex set赋予研究者更灵活、更自由，更大的选择空间，而且进一步丰富了CBA产品线。种类涉及免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等许多领域的蛋白定量分析。
6、操作简单，省时省力。CBA技术采用芯片式集成测定，所有检测只需一组标准曲线，就可计算出每种待测蛋白浓度；操作简单，整个流程只需要3.5小时，对待测样本可做实时分析，缩短检测了时间，提高了检测效率。
7、强大的软件分析系统。BD CBA软件具有强大的数据处理能力，直接将目标蛋白的检测结果换算成标准浓度；除了为用户提供待测物的计数结果外，还能提供可视轮廓或信号图形以帮助用户获得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系统两种版本供您选择。和传统的液相蛋白定量技术相比，CBA技术是一种“多元”和“同步”的检测技术。
革新的CBA技术与传统的蛋白定量相比有下列优点：
流式CBA检测技术
检测指标
一个样本同时做到多参数检测
所需样本量
样本用量少于50ul
平台
流式仪器，几乎适用于所有流式仪器，操作方便，节省时间
实验时间
不需要孵育过夜，流式细胞仪自动检测，标准曲线自动测定，专用软件自动计算
背景干扰
无酶-底物背景干扰
CBA检测对象
血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、细胞裂解物等
CBA应用领域
炎症因子的水平的分析
肿瘤研究及肿瘤疾病的辅助诊断、疗效和预后监测
凋亡相关蛋白分析
系统性红斑狼疮（SLE）和新生儿脓血症等免疫疾病的监控
干细胞研究和干细胞治疗监测
免疫学研究和免疫疾病的辅助诊断和监控
感染疾病的研究及辅助诊断和疗效评价
免疫功能监测
药效评价，药物研发、疫苗研究
细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析
CBA指标检测明细:
1、CBA指标
目录号
产品说明
检测指标
557800
Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit
IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ
560485
Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit
IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10
551287
Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit
IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF
552364
Mouse Inflammation Kit
IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70
550026
Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit
Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1,
IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE
560484
Human Th1/Th2/Th17 Kit
IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A
550749
Human Th1/Th2 Cytokine Kit
IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g
551809
Human Th1/Th2 Cytokine Kit II
IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g
551811
Human Inflammatory Cytokine Kit
IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70
552990
Human Chemokine Kit
IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10
561418
Human Anaphylatoxin Kit
C3A,C4A,C5A
2、CBA Flex Set 细胞因子检测指标
Human
Mouse
Rat
IFN-γ,INF-α
IL-1 α ,IL-1β,
IL-2,IL-3,
IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7,
IL-8, IL-9, IL-10,
IL-11,IL-12, IL-12p70,
IL-13,IL-17A, IL-21,
IL-23p40
TNF,TNFRⅠ,TNFRⅡ
IP-10
I-TAC
MIG
MCP-1
MIP-1 α, MIP-1 β
Eotaxin
RANTES
CD54(ICAM-1)
CD62E,CD62P,CD62L
CD106(VCAM-1)
sCD40
sCD154
sCD121a,sCD121b
Soluble CD14
Basic FGF
VEGF
Angiogenin
G-CSF,GM-CSF
LIF
LT-α
OSM
Granzyme A,
Granzyme B
Fas Ligand(FasL)
Fractalkine
IgA, IgG1, IgG2,
IgG3,IgG4, IgM,
Total IgG,
IFN- γ
IL-1 α ,IL-1β, IL-2,IL-3,
IL-4 , IL-5, IL-6, IL-9,
IL-10, IL-12, IL-12p70,
IL-13, IL-17A, IL-21,
IL-23p40,
TNF
MIG
MCP-1
MIP-1 α, MIP-1 β
RANTES
KC
CD62E(E-Selectin),
CD62L(L-Selectin)
G-CSF,GM-CSF
IFN- γ
IL-1 α, IL-4 , IL-6,
IL-10
TNF
3、CBA Flex Set 信号转导指标
Phospho Akt1(S473)
Phospho Akt2(S474)
Phospho BLNK (Y84)
Phospho p120 Catenin(Y228)
Phospho Btk (Y551)
Phospho MEK1/2(S222)
Phospho eNOS (S1177)
Phospho Paxillin(Y118)
Phospho ERK1/2 (T202/Y204)
Phospho Pyk2(Y402)
Phospho Itk (Y511)
Phospho SLP-76(Y145)
Phospho JNK1/2 (T183/Y185)
Phospho c-jun(S63)
Phospho p38 (T180/Y182)
Phospho stat3
Phospho PLCg (Y783)
Total Stat1
Phospho Rsk (T573)
Total Syk
Phospho Stat1 (Y701)
Total ZAP70
Phospho Syk (Y352)
Phospho ZAP70 (Y319)
4、CBA Flex Set 干细胞指标
Human Rex-1 Flex Set
Human Nanog Flex Set
Human Oct-4 Flex Set
